一秒钟了解pcr耗材，八联排管、pcr96孔板的选择

今天，我们来聊聊PCR实验中很关键的要素——耗材。作为PCR常客，了解PCR耗材相关的特性和术语是有必要的。
市面上的PCR耗材有很多，各种品牌、规格、颜色等，让人眼花缭乱。我们来慢慢认识它。材质PCR耗材的原材料通常是聚丙烯。它是一种很好的耐热惰性物质（使用温度范围为-30～140℃），能够承受PCR反应热循环过程中的热能变化，很好地封闭和保护PCR反应体系中的物质。

颜色常见的有白管和透明管。在传统PCR实验中，两者没有区别。但是，在相同的荧光定量/qPCR实验中，对于顶端信号读取的qPCR仪器（在管的上方采集荧光信号）来说，白管的灵敏度和一致性相对更高（下图A和B）。这是为什么呢？与透明管相比，A  白管得到的Ct值更低；B  白管得到的重复性更好

qPCR的核心数据是Ct值，而荧光信号是Ct值计算的数据来源，所以管内的荧光能否完好地传递至检测器是至关重要的。白色的管壁能够阻止荧光穿过管壁和折射（下图A），进而防止荧光传至加热模块（放管子的金属孔壁），被模块吸收或发生不一致反射等情况。相比于透明管，在白管的顶端能够采集到更强，更聚焦的荧光信号（下图B）。

A  透明管和白管中荧光信号走向；B  分别加入等量荧光素后，荧光强度对比

So，假如你正在使用的是顶读qPCR仪，那么安利一下，不妨用白管试试哦~

• 质量（是否干净）这里强调一下耗材质量的重要性。qPCR耗材必须保证没有污染物和抑制剂。高压和辐射能够去除细菌和DNA酶，但不能去除灰尘和DNA残留，它们可能会抑制PCR反应或产生非特异性扩增。物质是具有吸光度的，即便是很小的污染物也会吸收反应体系中的荧光，影响荧光信号的采集。用一个夸张版的实验来演示一下杂质污染对实验的影响，如下图所示，在八联排的一个反应孔中放入一粒杂质，不出所料，扩增结果曲线出现了显著的异常。 
• ↑  8复孔重复性反应结果，左边孔中的杂质让曲线“跑偏”

Tips  注意不要让耗材长期暴露在空气中，取出耗材后，一定要快速封好包装袋，避免用裸手接触。有条件的话，可在超净台中操作。容量/尺寸/通量
容量决定了可加样的多少（反应体积）。加样过多会导致热传导效率下降，溢出或交叉污染；而加样不足会引起样品蒸发损耗。qPCR仪的加热模块也会决定可适配的耗材和适用的反应体系大小。通量很容易理解，就是单次实验最多能上多少个样品。常见的容量和通量规格如下表所示：

容量规格也常用标准和低容量来区分，如下图所示。low profile（低容）耗材的高度更低，这种短小设计最大程度地减少了反应体系上方的空间（“死体积”——无用部分），降低热循环过程中的蒸发影响，同时能够让加热模块更大程度地将其包裹，提高热传导效率。因此，低容管也被称为“快速”管或板。

Tips  常见的反应体积一般为20 µL，推荐使用0.1 mL或low profile的低容反应管。管壁厚度PCR耗材的管壁厚度要均一，才能提供一致的热传导。超薄管壁较标准版薄50%，可进一步减少热屏障，带来更快更好的反应效果。当然，建议选超薄的。
透明度qPCR的管盖和封膜需要具有很高的光学透性，确保最佳的荧光信号的穿透和传递，减少失真（针对顶读qPCR仪）。管壁的透明度越高反倒会影响实验结果，理由在前面解释过。传统PCR可忽略此特点。裙边PCR板的裙边指的是板的周围延伸部分。额.......这个裙边作用是在构建反应体系时为移液过程提供稳定性支撑，以及结合自动化工作站时提供机械强度和抓手。常见的有三种：无裙边、半裙边和全裙边（对应下图A、B、C）。
Tips  简单理解就是，裙边的意义更多在于为工业化、自动化批量处理提供便利，与机械臂的结合。在常规科研实验室中可能不太需要，使用无裙边板即可。

封板膜
PCR封板膜由透明塑料或铝箔制成。黏性透明薄膜比较常见，适配于96或384孔板，要有足够好的光透性。可以在封膜时用个小卡片把孔周围的膜压紧，避免漏气等现象。实验室里的贴膜boy们应该很熟悉了吧。可以简单理解为......

黏性铝膜可能比较少见，尽管不适合qPCR，但对于光敏样品是最理想的耗材，由于可以穿刺，便于PCR中样品转移。（适用于传统PCR）

总结
耗材作为PCR体系的载体，对提高实验数据质量是非常重要的。希望本分享能够让你了解PCR耗材的一些小知识，为更好地选择耗材提供帮助。ok，就到这儿了，下回见咯~