免疫共沉淀(CoIP)实验原理及应用

发布日期:2023-12-05 17:15:23   浏览量 :123
发布日期:2023-12-05 17:15:23  
123

免疫共沉淀与免疫沉淀技术所使用的原理与方法大致相似,所不同的是,在免疫共沉淀中,对靶蛋白的结合与沉淀由另一个与之发生相互作用的蛋白替代。在免疫共沉淀或免疫沉淀的基础上,通过进一步与其它技术的结合,如聚丙烯酰胺凝胶电泳,还可进一步对靶蛋白的的分子量等特性进行鉴定。下面对此进行详细介绍。

实验原理

(1)免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP):利用抗原抗体特异性反应,对某个特定蛋白纯化富集的方法,主要过程包括捕获和固定。
(2)免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP):CoIP是在IP实验的基础上进行的扩展,主要用于蛋白之间的互作研究,常被用于鉴定特定蛋白复合物的中已知或未知的蛋白组分。其原理是基于抗体与抗原(靶蛋白)之间的特异性结合,此时如果样品溶液中存在能与靶蛋白相互作用的目的蛋白,会一同被拉下来,随后利用SDS-PAGE,Western Blot等方法对得到的目标蛋白进行分析,进而证明两者间的相互作用。

2、注意事项

*确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的,而并非外源非特异蛋白,单克隆抗体具有特异性强、可大量生产、易标准化等优点,使用单克隆抗体有助于避免污染的发生;

*要确保抗体的特异性,如果抗体不能和细胞溶解物中的抗原结合,则不会引起共沉淀反应;*确定蛋白间的相互作用是发生在细胞中,而不是由于细胞的溶解才发生的。

3、实验技巧为了确保最终得到的结果是天然状态下的相互作用,而不是由于某些方面造成的人工相互作用(也就是“假阳性”),在Co-IP的实验设计过程中,需要设置正确的对照。假设Co-IP实验的实验组为“磁珠+抗X抗体+靶蛋白X+目的蛋白Y”,则可能出现的“假阳性”及对应需要设置的实验对照如下表所示:

公司 浙江联硕生物科技有限公司
关注公众号
客服小徐
免责声明:本站部分资讯、图片来源于网络及网友投稿,如有侵权请及时联系客服,我们将尽快处理。
版权所有:浙江联硕生物科技有限公司
技术支持 反馈 统计