牛血清白蛋白在实验中的作用

发布日期:2024-02-01 17:19:08   浏览量 :59
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牛血清白蛋白(BSA)在生化实验中有广泛的应用, 接下来为大家介绍其中两种作用。
牛血清白蛋白测定蛋白浓度:
按50:1配置BCA工作液。10ulC液(蛋白标准)+90ulPBS液稀释成0.5mg/ml的蛋白标准液。
再分别以0、1、2、4、8、12、16、20ul将蛋白标准液加入96孔板的第1~8标准孔中,在其他样品孔中加入10ul待测样品。分别加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,室温放置2小时。用酶标仪测定蛋白浓度:测定A562,依标准曲线算出蛋白浓度。
牛血清白蛋白SDS-PAGE电泳
1、制胶:按比例配制分离胶,缓缓地摇动溶液,使激活剂混合均匀,将凝胶溶液平缓地注入两层玻璃J中,再在液面上小心注入一层水,以阻止氧气进入凝胶溶液中,静置40min。
同前按比例配制浓缩胶,但混匀溶液时不要过于剧烈以免引入过多地氧气。
吸去不连续系统中下层分离胶上的水分,连续平稳的注入凝胶溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齿尖留有气泡,静制60min以上以保证完全聚合。
2、预电泳:将聚合好的凝胶安置于电泳槽中,小心拔去梳子,加入电泳缓冲液后低电压10-20V的预电泳20-30min。
3、样品准备:首先计算上样体积,然后按样品上样buffer=4:1的比例加入上样bufer混匀,沸水10分钟,冰上5分钟。
4、加样:预电泳后依次加入标准品(Marker)和待分析样品。(加样时间要尽量短,以免样品扩散,可在未加样的孔中加入等量的样品缓冲液避免边缘效应。)每个泳道加5ul 。
5、电泳:加样完毕,选择80V恒压进行电泳,电泳直至溴酚蓝染料前沿到达两胶交界处(约20分钟),更换至100V恒压电泳,电泳直至溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端处,即停止电泳(约1小时20分钟)。

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