ELISA实验原理

发布日期:2024-02-28 17:16:19   浏览量 :81
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酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)是免疫学和分子生物学中广泛使用的实验室技术,由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971年首次描述。该测定依赖于抗原-抗体相互作用的原理,并利用酶和比色检测来量化目标分子,主要用于检测和量化生物样品中特定蛋白质、肽、抗体或抗原的存在。ELISA测定通常应用于各个领域,包括临床诊断、药物研究和生命科学基础研究。

在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种:

直接ELISA:抗原通过一段时间的孵育被动地附着在塑料固相载体上,经过简单的洗涤后,通过添加与酶共价连接的抗体来检测抗原。孵育和洗涤后,通过添加色原/底物使酶活性产生颜色变化来显色。在规定的时间后通过化学手段终止酶活性后读取显色情况。在分光光度计中读取颜色。该方法相对简单,但它在灵敏度方面可能存在局限性,特别是当抗体-抗原相互作用相对较弱时。

间接ELISA:间接ELISA是在直接ELISA的基础上添加酶标二抗进行检测。抗原通过孵育被动附着到孔上,洗涤后,将抗原特异性抗体(一抗)与抗原一起孵育。 清洗孔并通过添加与酶共价连接的抗物种抗体(二抗)来检测结合的抗体。二抗对于产生所添加的第一抗体的物种具有特异性。

夹心ELISA:将捕获抗原的抗体(捕获抗体)附着在固相载体上,洗掉多余的未结合抗体后,添加抗原并被特异性捕获,通过直接ELISA或间接ELISA的形式检测抗原。这种组合进一步提高了检测的灵敏度和特异性,是最常见的ELISA实验形式。


竞争性ELISA:在竞争性ELISA中,固定量的标记抗原与样品抗原(样本)竞争与固定化抗体的结合。信号与样品中抗原的浓度成反比。

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