一、实验操作
直接ELISA是将特异性抗体直接固定在固相载体上,待测样本中的抗原在洗涤过程中与抗体结合,再与酶标记的二抗结合,最后通过底物显色反应检测抗原。
在该过程中,抗体既可以与固相载体结合,也可以与抗原结合,因此被称为“直接”ELISA。
间接ELISA是将特异性抗体与酶标记的二抗结合,待测样本中的抗原在洗涤过程中与抗体结合,再与酶标记的二抗结合,最后通过底物显色反应检测抗原。在该过程中,抗体只能与固相载体结合,因此被称为“间接”ELISA。
二、应用范围
直接ELISA适用于检测可溶性抗原,而间接ELISA则适用于检测细胞表面抗原、包被在颗粒性抗原或半抗原上的抗原等。
三、灵敏度
直接ELISA的灵敏度通常比间接ELISA高,因为直接ELISA中抗原可以与固定在固相载体上的抗体和酶标记的二抗分别结合,而间接ELISA中抗原只能与固定在固相载体上的抗体结合。
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