木聚糖酶活性测定方法分享

木聚糖是一种存在于植物细胞壁中的多糖类物质，是植物半纤维素的主要成分。

木聚糖酶分布广泛，可以从动物、植物及微生物体内获得。

检测原理：

木聚糖酶可以将底物木聚糖降解为寡糖和单糖，具有还原性的寡糖和单糖在沸水浴的条件下，能够和DNS试剂发生显色反应。

通过反应溶液的颜色的变化，来确定还原糖的含量。

因为还原糖的生成量和反应液的木聚糖活力是成正比的，通过分光光度法可以测定，计算出样品中的木聚糖酶活力。

检测所用的试剂：

乙酸溶液、乙酸钠溶液、氢氧化钠溶液、乙酸-乙酸钠缓冲溶液、木糖溶液、木聚糖溶液、DNS试剂。

所需要的仪器设备：

碾钵、分样筛、分析天平、pH计、磁力搅拌器、电磁振荡器、离心机、恒温水浴锅、分光光度计等。

标准曲线：

吸取乙酸-乙酸钠缓冲溶液4ml，加入DNS试剂5ml，沸水浴加热5min，用自来水冷却至室温，用水定容至25ml，制成标准空白样。

分别吸取木糖溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml，加入缓冲溶液定容至100ml，配制成0.1-0.7mg/ml的木糖标准溶液。

按照上述的标准溶液配制，分别做2次平行。吸取木糖标准溶液2ml，分别加入2ml水和5mlDNS试剂。

电磁振荡3s，沸水加热5min，用自来水冷却至室温，用水定容至25ml。

以标准空白样作为对照，在540nm处测吸光度OD值。

以木糖浓度为Y轴，吸光度OD值为X轴，绘制标准曲线。

检测过程：

吸取10ml木聚糖溶液，37℃平衡10min。

吸取10ml经过稀释的木聚糖酶溶液，37℃平衡10min。吸取2ml平衡过的木聚糖酶液，加入5mlDNS试剂，电磁振荡3s。

加入2ml木聚糖溶液，37℃保温30min。沸水浴加热5min，用自来水冷却至室温，加水定容至25ml，电磁振荡3s。

以标准空白样为空白对照，在540nm处测定吸光度。以同样的方法，加入2ml的木聚糖酶，电磁振荡3s，37℃精确保温30min，加入5mlDNS试剂，电磁震荡3s，以终止酶解反应。

沸水浴加热5min，用自来水冷却至室温，加水定容至25ml，振荡3s，以标准空白样为空白对照，在540nm处测定吸光度。

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