CCK-8试剂盒的操作步骤

CCK-8试剂盒，是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。
CCK法应用非常广泛，如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性测验等。

操作步骤：

1、在96孔板中配置100μl的细胞悬液，将培养板在培养箱预培养24小时（在37℃，5%CO2的条件下）。
2、向培养板加入10μl不同浓度的待测物质。
3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间（例如6、12、24或48小时）。
4、向每孔加入10μlCCK-8溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数）。
5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。
6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度，如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。
7、如暂时不测定OD值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μl0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下，在24小时内吸光度不会发生变化。

注意： 如果待测物质有氧化性或还原性，可以加CCK之前更换新鲜培养基（除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加入新的培养基），去掉影像。 当然影响比较小的情况下，可以不更换培养基，直接扣除培养基加入后的空白吸收即可。

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