超滤离心管具体用法

超滤离心管是一种采用优化过滤结构的设计方式，减少浓差极化，降低了膜易污染堵塞机率，加快了离心速度，缩短了离心所需的时间；超滤离心管还可用的膜表面面积提供快速样品处理。

超滤离心管具体用法：

(1)选择合适的超滤管。通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。

(2)新买来的超滤是干燥的，使用前加入超纯水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。

(3)平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤(离心机预冷至4度)。不同离心机的转速 rpm换算成g之后，有所不同。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理。膜与转轴的方向根据说明书调整(角转离心机的情况是膜与轴垂直)。在实际使用中，一般转速开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。

(4)当浓缩到剩下1ml时，取50ul缓冲溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mgml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测，继续加入剩下的蛋白液浓缩(在冰上操作，防止蛋白受热)，直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适;前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的缓冲溶液，直到蛋白不发生沉淀为止。

(5)前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer(经0.22um超滤膜超滤)，再浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。

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