冰冻切片包埋剂的制备方法及注意事项

冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。

因其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。

制备步骤:

将组织在恒温冷冻机里面切片。

冷冻腔内的温度一般设置为-18℃至-25℃，根据不同组织调节不同腔温，平时应将冷冻头放置在冷冻台上。

冷冻切片机应长期处在冷冻恒温状态。

1、当冰冻组织提取好之后，在冷冻头上放少量的OCT或羧田基纤维素(可用普通胶水代替)，放上组织，速冻。

2、待组织冻结后，将冷冻头装刀切片机上。

3、粗切，修出切面细切几张，用毛笔刷去刀上组织片。

4、放下抗卷板，开始切片，切片速度一般为5-6微米，切出的片子用载玻片贴附后立即放入甲醇冰醋酸液(97ml甲醇+3ml冰醋酸)中固定，固定时间为10-20秒。

注意事项:

1、速冻是冰冻切片的关键，因为只有速冻才能减少组织内的冰晶，最好的办法就是将速冻头迅速压在组织上，切好后就可以冻片，特别适用于较脆的组织。

2、固定切片后应立即放入甲醇冰醋酸中固定，不能等切片干后再固定，后者容易造成细胞退变。固定液有很多种，甲醇作用快、收缩小、染色较清晰，是冰冻切片最理想的固定液，而每97ml加入冰酸醋3ml，会减少某些胶质、钙质较多的组织不容易掉片。

3、包埋剂可用普通胶水代替，但要加入适量的水(胶水与水的比例大约在2:1)。

太稀了容易损伤切片刀，太稠了黏在刀上不容易洗掉，影响切片的质量。

4、冰冻用切片刀不仅要磨得快，而且要磨得直，否则切出来的片子就会不平整，不能进入抗卷板(最好使用一次性刀片)。

5、如组织发脆，可以等几分钟后再切，也可用手在组织上稍微加温;如果用手去摸组织块，最好戴手套，或用玻片间的纸夹在手与组织之间，以防感染。

6、冷冻室的室温冬天一般设置在-19℃左右，夏天设置在-22℃左右。

不同的组织有不同的温度要求，如肝脏、甲状腺组织温度应设置在-15℃左右，脂肪组织一般设置在-35℃以下。

7、冷冻切片机应长期处于恒温冷冻状态，经常的开关电源容易造成设备损坏。

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