蛋白Marker主要分为未预染蛋白Marker和预染蛋白Marker两种,另外还有一些其他类型的蛋白Marker:如显影蛋白Marker等。
未预染蛋白Marker:
是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液。
非预染蛋白Marker在电泳过程中看不到,电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用,无法在实验过程中起预示作用。
但是由于蛋白没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以最准确。
预染蛋白Marker:
是纯化好的几种蛋白,通过与染料共价耦联后混合在一起,在电泳过程中或者转膜时可以直接观察到的一种蛋白Marker。
预染蛋白Marker又可分为单色预染和多色预染。
Marker条带越多参考价值越大,同时也越难区分,若用不同颜色则容易辨认;
单色的Marker通常利用其中某些条带加倍浓度来提示其大小。
预染蛋白Marker在电泳过程可以起到预示作用,当观察目标蛋白大小位置进入最佳分辨区时,停止电泳,以得到最佳分辨效果。
转膜过程可以监测转膜效率,同时可以在膜上标记蛋白分子量。
但是,预染蛋白Marker与染料共价偶联,在不同的缓冲条件下,电泳迁移特性可能会发生某些变化,导致一些偏差。
也就是说,预染蛋白Marker条带代表的是相对大小,而不是绝对大小。
显影蛋白Marker:
显影蛋白Marker,蛋白条带中含有IgG结合位点,IgG结合位点会结合用于检测靶蛋白的一抗或二抗,使得蛋白Marker在印迹膜上可与目的条带一同呈现。
通常会有两个预染条带,便于动态观察蛋白质电泳状态,判断转膜效果和方向;
结合抗体后经化学发光检测可显示多个条带。
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