CCK-8细胞实验原理及步骤

实验原理
CCK8全称Cell Counting Kit-8试剂，可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。
其基本原理为：该试剂中含有水溶性的四唑盐WST-8，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物。
生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。
实验步骤
DAY 1
1、对前一天培养好的细胞消化、离心、计数。
2、在96孔板上接种100μL 3k-7k/孔的细胞，在37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养24小时。
DAY 2
1、在显微镜下观察细胞生长状态和密度，取生长状态良好，细胞分布及密度均一的孔进行实验。
2、配制不同浓度梯度的样本溶液，如300、100、33.3、11.1、3.7、1.2、0.4、0.14uM。每个浓度三个复孔加入到96孔板中，在37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养适当时间长度。如6，12，24或48小时。
DAY 3/4
1、CCK8使用前在室温下解冻并离心。
2、用倒置显微镜检测细胞生长状态，并用4X/10X取生长状态良好，细胞分布及密度均一的孔拍照记录。
3、在每孔中加入10μL的CCK-8溶液。
4、在37℃、5% CO2、90%湿度条件下培养0.5-4小时。
5、用酶标仪在450 nm处测量吸光度。
6、用Excel及Graphpad Prism处理并分析结果。