细胞划痕实验的所需材料、实验步骤

所需材料
1、仪器：细胞计数仪、台式离心机、CO2培养箱、倒置显微镜、移液枪、移液管移液器、4℃和-20℃冰箱、6孔培养板、直尺、maker笔。
2、试剂：细胞适配培养基、FBS、PBS、胰酶、样本溶剂。
实验步骤
1、划线：先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔，每孔至少穿过5条线；
2、铺板：处于对数生长期的细胞，胰蛋白酶消化成单细胞悬液，接种于6孔培养板；细胞铺板6w/孔，接种原则为过夜后融合率达到100%，每孔最终的培养基总量2mL；
3、细胞培养37℃、5％CO2培养箱中培养24h；
4、划痕：第二天用200微升枪头比着6孔板盖子或直尺，平行或垂直于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜；
5、清洗：PBS冲洗细胞3次，除去划下的细胞，加入无血清培养基；
6、拍照：擦去6孔板背后的marker横线划痕。4倍镜下进行拍照，保证划痕居中且垂直，注意背景一致，加入待测样本，设置浓度梯度，可按0，6，12，24h时间点取样，拍照。
7、结果分析，使用Image J软件打开图片后，随机划取6至8条水平线，计算细胞间距离的均值或者划痕面积均值。
8、数据处理：
细胞迁移率(伤口愈合率)=(初始划痕面积-t时刻划痕面积)/初始划痕面积
细胞迁移率(伤口愈合率)=(初始细胞间距离均值-t时刻细胞间距离均值)/初始细胞间距离均值