冰冻切片包埋剂的制备方法及注意事项

发布日期:2023-09-15 17:19:12   浏览量 :285
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冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。
因其制作过程较石蜡切片快捷、简便,而多应用于手术中的快速病理诊断。
制备步骤:
将组织在恒温冷冻机里面切片。
冷冻腔内的温度一般设置为-18℃至-25℃,根据不同组织调节不同腔温,平时应将冷冻头放置在冷冻台上。
冷冻切片机应长期处在冷冻恒温状态。
1、当冰冻组织提取好之后,在冷冻头上放少量的OCT或羧田基纤维素(可用普通胶水代替),放上组织,速冻。
2、待组织冻结后,将冷冻头装刀切片机上。
3、粗切,修出切面细切几张,用毛笔刷去刀上组织片。
4、放下抗卷板,开始切片,切片速度一般为5-6微米,切出的片子用载玻片贴附后立即放入甲醇冰醋酸液(97ml甲醇+3ml冰醋酸)中固定,固定时间为10-20秒。
注意事项:
1、速冻是冰冻切片的关键,因为只有速冻才能减少组织内的冰晶,最好的办法就是将速冻头迅速压在组织上,切好后就可以冻片,特别适用于较脆的组织。
2、固定切片后应立即放入甲醇冰醋酸中固定,不能等切片干后再固定,后者容易造成细胞退变。固定液有很多种,甲醇作用快、收缩小、染色较清晰,是冰冻切片最理想的固定液,而每97ml加入冰酸醋3ml,会减少某些胶质、钙质较多的组织不容易掉片。
3、包埋剂可用普通胶水代替,但要加入适量的水(胶水与水的比例大约在2:1)。
太稀了容易损伤切片刀,太稠了黏在刀上不容易洗掉,影响切片的质量。
4、冰冻用切片刀不仅要磨得快,而且要磨得直,否则切出来的片子就会不平整,不能进入抗卷板(最好使用一次性刀片)。
5、如组织发脆,可以等几分钟后再切,也可用手在组织上稍微加温;如果用手去摸组织块,最好戴手套,或用玻片间的纸夹在手与组织之间,以防感染。
6、冷冻室的室温冬天一般设置在-19℃左右,夏天设置在-22℃左右。
不同的组织有不同的温度要求,如肝脏、甲状腺组织温度应设置在-15℃左右,脂肪组织一般设置在-35℃以下。
7、冷冻切片机应长期处于恒温冷冻状态,经常的开关电源容易造成设备损坏。

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