二甲基亚砜在细胞冻存中如何使用?

发布日期:2023-09-15 17:19:59   浏览量 :286
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二甲基亚砜是一种重要的渗透型细胞保护剂,在深低温(零下200度)保存细胞时冻存过程中,为防止细胞内液冰晶形成、渗透压改变、细胞结构紊乱等导致的损伤,有必要使用含有DMSO冷冻保护剂。
DMSO能够快速穿透细胞膜进入细胞中,降低冰点、延缓冻存过程,同时提高细胞内离子浓度,减少细胞内冰晶的形成,从而减少细胞损伤。
深低温时二甲基亚砜的细胞毒性受到抑制,复苏时动作要快,尽快洗掉二甲基亚砜,否则会造成对细胞严重的毒性。
二甲基亚砜(DMSO)是最/好的细胞冻存保护剂,但也是一种以细胞毒性很大的化学试验剂,研究结果表明,培养液中DMSO浓度为10%时,细胞生长抑制率近100%;1‰浓度时抑制率为35%,即使是0.04‰的浓度,DMSO对细胞的生长也有不利的影响。
如何使用
一、细胞冻存
1、配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的冻存培养液。
2、取对数生长期的细胞,去除旧培养液,用PBS清洗。
3、去除PBS,加入适量胰蛋白酶(覆盖培养皿表面)把单层生长的细胞消化下来。
4、离心1000rpm,5min。
5、去除胰蛋白酶,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5×106/ml~1×107/ml。
6、将细胞分装入冻存管中,每管1~1.5 ml。
7、在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者。
8、冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/ min;当温度达-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

二、细胞复苏
1、从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。
2、从37℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管并滴加10倍以上培养液,混匀。
3、离心,1000rpm,5min。
4、弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养。
5、次日更换一次培养液,继续培养。

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