胶原酶如何配置及使用方法

发布日期:2023-09-18 17:08:16   浏览量 :694
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胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶,它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构,而不损伤其他蛋白质和组织。
胶原酶的化学本质是一种蛋白质,因此它对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感,极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。

配置:
胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配置、消毒灭菌和储藏。
注意:
因为I型胶原酶分子颗粒比胰酶大,不容易过滤,因此可以用蔡式滤器过滤除菌。
钙、镁离子和血清成分不会影响胶原酶的消化作用,因而可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培养液配置。

使用方法:
1、将漂洗、修剪干净的组织剪成1-2mm左右的小块。
2、将组织放入离心管或三角烧瓶中加入30-50倍体积的胶原酶溶液,旋紧盖子或密封烧瓶。
3、将烧瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱内每隔3分钟振摇一次,如能放在37℃的恒温震荡水浴箱中则更好。
4、收集消化液(有时含个别组织块及没有充分消化的组织碎屑则需用100目不锈钢网过滤),离心1000r/min,5min,除去上清,用Hanks液或无血清培养液离心漂洗1-2次,除去上清,加培养液制成细胞悬液,接种培养瓶。

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